本发明公开了一种肿瘤早期诊断用隐形造影材料及其制备方法,采用可生物降解纳米球包埋医学造影剂、在纳米球的表面偶联与肿瘤细胞有特异性相互作用的靶分子、并接枝pH敏感型高分子。纳米球表面的靶分子在正常生理条件下隐藏在pH敏感型高分子之中,不能与正常细胞的非特异性抗原或受体发生相互作用,故该隐形造影材料不能被正常细胞非特异性摄取;而纳米球表面的靶分子在肿瘤组织环境下由于高分子收缩而暴露出来,与肿瘤细胞表面的抗原或受体发生特异性相互作用,从而实现将隐形造影材料高精准地靶向输送至肿瘤部位,降低医学造影剂的用药剂量、毒副作用和成本。
1.一种肿瘤早期诊断用隐形造影材料,其特征在于,由可生物降解纳米球、包埋于所述的可生物降解纳米球内部的医学造影剂、连接于所述的可生物降解纳米球表面的靶分子和pH敏感型高分子构成;其中,所述的医学造影剂为MRI造影剂、CT造影剂、PET造影剂或荧光素造影剂;所述的pH敏感型高分子为在pH5.0~6.0范围内发生收缩的高分子化合物,并且所述的pH敏感型高分子为异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物和异丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸共聚物中的至少一种,分子量范围为2k-1000k;所述的可生物降解纳米球的材料选自寡肽、蛋白质、多糖、聚醚类、聚酯类高分子中的至少一种,所述的可生物降解纳米球的粒径为500nm以下;而且,在正常生理条件下,即机体的pH值在7.3~7.4之间,所述的纳米球表面的靶分子隐藏在线形伸展状态的pH敏感型高分子之中;所述的pH敏感型高分子在pH5.0~6.0范围内发生转变,由线形伸展状态变成收缩状态,使得所述的靶分子能够暴露出来。
2.根据权利要求1所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料,其特征在于,所述的pH敏感型高分子为异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物。
3.根据权利要求1所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料,其特征在于,所述的医学造影剂的粒径为15nm以下。
4.根据权利要求3所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料,其特征在于,所述的MRI造影剂选自超顺磁性氧化铁纳米粒子、顺磁性Gd-DTPA配合物、Gd-DOTA配合物和Gd₂O₃纳米粒子中的至少一种;所述的CT造影剂选自碘海醇、硫酸钡、金纳米颗粒、金纳米棒和金纳米笼子中的至少一种;所述的PET造影剂选自¹⁸F-FDG、⁶⁴Cu、¹²⁴I和⁹⁴C中的至少一种;所述的荧光素造影剂为酞菁。
5.根据权利要求1所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料,其特征在于,所述的可生物降解纳米球的粒径为50-200nm。
6.根据权利要求1所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料,其特征在于,所述的靶分子选自单克隆抗体、叶酸或半乳糖胺中至少一种。
7.根据权利要求1所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料,其特征在于,所述的pH敏感型高分子与靶分子的数目比为0.2-5.0。
8.一种权利要求1~7任一所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备包埋有医学造影剂的可生物降解纳米球;(2)通过共价偶联反应将所述的靶分子连接到步骤(1)中得到的可生物降解纳米球的表面上,得到中间体;(3)在步骤(2)得到的中间体的表面上,采用活性自由基聚合技术合成所述的pH敏感型高分子,得到所述的肿瘤早期诊断用隐形材料。
9.根据权利要求8所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料的制备方法,其特征在于,步骤(3)替换为:将pH敏感型高分子通过共价偶联反应连接到步骤(2)得到的中间体的表面上,得到所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料。技术领域
本发明涉及纳米造影材料,尤其是涉及一种具有高特异性靶向功能的纳米造影材料及其制备方法。
背景技术
恶性肿瘤(癌症)是严重威胁人类健康的主要疾病之一,到目前为止,人类还没有找到治疗各种恶性肿瘤的有效方法。公认的降低癌症死亡率的方法是,早发现、早治疗,在癌细胞扩散前对其进行检测,并进行有效治疗。目前,各类恶性肿瘤的主要诊断技术只能发现尺寸大于1厘米的肿瘤,对更小的肿瘤却无能为力,如磁共振成像(MRI)[Biomaterials,2011;32:5167-5176]、计算机X射线断层成像(CT)和正电子发射断层成像(PET)。医学造影剂能提高这些诊断技术的检测灵敏度与空间分辨率,为了实现对各种恶性肿瘤的早期检测与诊断,需要发展各类高性能的医学造影剂[Nat.Nanotechnol.,2010;5:815-821]。第一种商用MRI造影剂是德国Schering公司H.J.Weinmenn研制开发的Gd-DTPA,它是二乙三胺五乙酸(DTPA)与Gd(III)的配合物[Angew.Chem.Int.Edit.,2010;49:1231-1233]。随后,研究较多的是超顺磁性造影剂。超顺磁性造影剂的磁矩和磁化率均远大于人体组织结构,也远大于顺磁性螯合物,但因其水溶性极小,只能采用匀浆或胶体的形式给药。由于此类造影剂多具有趋肝、脾肿瘤的性能且肾毒性小,故倍受人们的重视,工作重点是选择适当的载药介质、配方、剂型和制备方法,并进行性质试验[Biomaterials,2011;32:4584-4593]。中国科学院化学研究所高明远研究员课题组用FeCl₃·6H₂O成功地制备了尺寸形貌可控的磁性纳米晶体材料,还深入探索了以FeCl₃·6H₂O为单一原料制备Fe₃O₄纳米晶体的机理,该磁性纳米晶体可以很好地应用于磁共振成像[Angew.Chem.Int.Ed.,2005;44:123-126];随后,他们采用“一锅反应法”合成了共价键结合的磁性MPEG-COOH(monocarboxyl-terminatedxa0poly(ethylenexa0glycol))纳米晶体,活体大鼠MRI实验结果表明MPEG修饰的磁性纳米颗粒具有非常好的生物相容性,作为MRI造影剂具有很大的潜能[Adv.Mater.,2005;17:1001-1005];用一步反应制备出的表面修饰有羧基PEG的磁性纳米微粒不仅具有优异的MRI造影功能,而且表现出较长的血液循环时间和低生物毒性[Adv.Mater.,2006;18:2553-2556]。东南大学顾宁教授课题组制备了一种具有PLA/PVA双层聚合物外壳(厚度为50-70nm)的包膜微泡,并成功用其包埋12nm的超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPION),显著提高了包膜微泡的磁化率,体内MRI实验证明了其作为造影剂的良好效果[Biomaterials,2009;30:3882-3890]。具有超顺磁性的纳米颗粒由于其独特的磁学和电学性能、具有大的比表面积、高的化学稳定性等优点,在MRI造影剂领域表现出诱人的应用前景。近几年,有研究将靶分子(能靶向作用于癌细胞的化合物,如单克隆抗体、叶酸和半乳糖胺等配体)与超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPION)结合,提高了SPION对肿瘤组织的靶向性。例如,东华大学史向阳教授课题组采用热分解法成功地制备了表面镀有硅的超顺磁性氧化铁核壳型纳米粒子(Fe₃O₄SiO₂xa0NPs),然后将其表面氨化、共价偶联顺磁性钆复合物(Gd-DTPA,DTPA:二乙三胺五乙酸)与精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸寡肽(RGD),体内MRI实验表明该多功能Fe₃O₄SiO₂(Gd-DTPA)-RGD纳米粒子能特异性靶向表面表达有αvβ3整合素的癌细胞[Biomaterials,2011;32:4584-4593]。西班牙萨拉戈萨大学Miguel-Sancho教授课题组在三甘醇中高温热解乙酰丙酮铁,制备了水溶性的SPION,并在SPION表面偶联了一种模型抗体,用酶联免疫法(ELISA)检测了抗体-SPION复合物的免疫反应,该研究表明,在SPION表面嫁接一种针对癌细胞表面抗原的单克隆抗体,可以制得一种对肿瘤组织具有靶向性的MRI造影剂[Chem.Mater.,2011;23:2795-2802]。新加坡国立大学康燕堂教授课题组通过原子转移自由基聚合法(ATRP)在SPION表面偶联了聚甲基丙烯酸缩水甘油酯-聚乙二醇甲基丙烯酸酯共聚物(P(GMA-co-PEGMA)),PEGMA起到稳定纳米粒子、延长其体内循环时间的作用,通过GMA来嫁接能靶向癌细胞的配体叶酸,从而制得一种能主动靶向作用于肿瘤组织的MRI造影剂[Langmuir,2012;28:563-571]。天津大学常津教授课题组用偶联有配体叶酸的聚合物磷脂包裹SPION,并进一步评估了其作为靶向型MRI造影剂的效果[Pharmaco1.Res.,2011;64:410-419]。这些研究都通过靶分子(单克隆抗体或配体)与SPION的结合,在提高SPION对肿瘤组织的靶向性方面做出了贡献,对恶性肿瘤的早期诊断具有重要的科学意义与社会经济价值。计算机X射线断层成像(CT)利用人体不同组织对X射线的透过率的不同,可以对人体和组织进行成像[Naturexa0Medicine,1996;2:473-475]。CT造影剂的使用更是极大地增加了靶组织与周围组织的区分度[Physicsxa0inxa0Medicinexa0andxa0Biology,2002;47:3369-3385]。目前的X射线造影剂有包入脂质体的碘造影剂[Academicxa0Radiology,2003;10:475-483],镝-DTPA-右旋糖苷聚合体[Academicxa0Radiology,2002;9:784-792],PEG包裹的碘聚合物[Advancedxa0Drugxa0Deliveryxa0Reviews,2002;54:235-252],荧光溴化物[Academicxa0Radiology,1994;1:151-153],以及连接到聚乙烯壳的碘[Academicxa0Radiology,1999;6:61-65]等,其中,基于有机小分子碘的造影剂的应用更为普遍。这是因为碘具有较高的X射线吸收系数[Advancedxa0Drugxa0Deliveryxa0Reviews,1999;37:159-173]。然而,这些含碘物质由于迅速被肾脏清除而使得造影时间很短,具有肾毒性,而且,X射线会诱导含碘物质电离出碘离子,造成毒性。随着纳米材料技术和生物纳米技术的发展,新型基于纳米颗粒的CT造影剂有望改善上述缺点[Small,2007;3:333-341]。纳米颗粒的尺寸小(1~100nm),可以进入微米尺寸内径的毛细血管[Journalxa0ofxa0Artificialxa0Organs,2005;8:77-84],因此能更多地进入组织;而且,由于癌变组织部位毛细血管的通透性增强[Americanxa0Journalxa0ofxa0Pathology,2000;156:1363-1380],纳米颗粒可以通过渗漏作用更多地沉积在癌变组织上,从而更好地对癌变区域成像[CT理论与应用研究,2009;18:15-25]。另外,正电子发射断层成像(PET)已广泛应用于多种恶性肿瘤的诊断,对肿瘤患者的诊断价值也越来越引起关注。近20年来,核素¹⁸氟标记的2-(氟-18)-2-脱氧葡萄糖(FDG)正电子发射断层成像(PET)检查方法渐渐发展起来。FDG-PET可以显示病灶的代谢特征,有助于区别病灶的良恶性质,且对肿瘤的分期也有一定的帮助[中华结核和呼吸杂志,2005;28:221-224]。文献报道¹⁸F-FDGxa0PET显像较^99m锝-亚甲基二磷酸盐显像更灵敏[Radiology,1999;212:803-809]。相对于MRI、CT和PET等成像模式而言,光学成像具有无辐射、低成本的特点,尤其是近红外荧光成像,可以部分实现对深层组织和器官的探测和成像,在光学成像方面具有特定的优势[Naturexa0Methods,2009;6:465-469]。光学成像的核心是荧光素造影剂,主要面临的问题包括深层次光的传输和采集以及荧光素造影剂的发光量子效率、抗漂白性、良好的生物相容性和靶向性[Biomaterials,2009;30:5592-5600]。含四吡咯基团的近红外荧光染料(如酞菁)是近年来关注的焦点,因具有良好的光物理行为使其在近红外探针方面具有较好的应用前景[J.Am.Chem.Soc.,2009;131:2432-2433]。在荧光素造影剂的设计中,靶向性是一个关键问题,最为常见的是利用细胞表面的受体设计主动靶向肿瘤细胞的给药系统[高等学校化学学报,2011;32:1010-1012]。根据上述医学造影材料的国内外研究现状分析,合成对肿瘤组织具有靶向性的造影材料、减小造影剂的用药剂量、降低毒性和制备成本是研究的主要趋势。目前,靶向造影材料的制备一般是通过在造影剂上结合靶分子(单克隆抗体或配体),从而实现对癌细胞的特异性。然而,正常的细胞表面也存在着非特异性抗原或者受体,这些抗原或受体也能与靶分子(单克隆抗体或配体)结合,从而影响了各种诊断技术的检测灵敏度与空间分辨率,因此,发展出具有更高特异性靶向功能的造影剂是目前迫切需要解决的问题。
发明内容
本发明提供了一种肿瘤早期诊断用隐形造影材料及其制备方法,所述的隐形造影材料能高特异性靶向输送至肿瘤部位。一种肿瘤早期诊断用隐形造影材料,由可生物降解的纳米球、包埋于所述纳米球内部的医学造影剂、连接于所述纳米球表面的pH敏感型高分子和靶分子构成。所述的pH敏感型高分子在pH5.0~6.0范围内易于发生转变,由线形伸展状态变成收缩状态,使得所述的靶分子能够暴露出来,同时对细胞具有较小的毒性,所述的pH敏感型分子优选为异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物和异丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸共聚物中的至少一种,分子量范围为2k-1000k。本发明的上述肿瘤早期诊断用隐形造影材料特异性靶向肿瘤细胞的原理如图1所示。在正常生理条件下,机体的pH值在7.3~7.4之间,所述的纳米球表面的靶分子隐藏在线形伸展状态的pH敏感型高分子之中,不能与正常细胞的非特异性抗原或受体发生相互作用,故该隐形造影材料不能被正常细胞非特异性摄取;而在肿瘤组织环境下,pH值约为5.5,pH敏感型高分子会发生相转变而收缩,使纳米球表面的靶分子暴露出来,与肿瘤细胞表面的抗原或受体发生特异性相互作用,隐形造影材料被肿瘤细胞摄取,从而实现将造影剂高精准地靶向输送至肿瘤部位,提高了检测灵敏度与空间分辨率,降低造影剂的用药剂量、毒副作用和成本。所述的医学造影剂的作用是用来提高成像分辨率,本领域人员熟知的MRI造影剂、CT造影剂、PET造影剂或荧光素造影剂都能应用于本发明,为了使得所述的造影剂能顺利地包埋于可生物降解纳米球(简称纳米球)内部,造影剂粒径优选为15nm以下。所述的MRI造影剂为具有MRI造影功能的材料,优选为T₂类MRI造影剂和T₁类MRI造影剂,所选材料需要具有良好的水溶性,所述的T₂类MRI造影剂进一步优选为超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPION),所述的T₁类MRI造影剂进一步优选为有较大的有效磁矩的Gd³⁺、Dy³⁺、Mn²⁺或Fe³⁺等小分子顺磁性造影剂,或与适当的配体形成稳定的螯合物的大分子顺磁性造影剂,如Gd-DTPA配合物、Gd-DOTA配合物和Gd₂O₃纳米粒子中的至少一种,其中,DTPA为二乙三胺五乙酸,DOTA为1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N′,N′′,N-四乙酸。所述的CT造影剂是一种具有CT造影功能的材料,所选材料需要具有良好的水溶性,优选为具有CT造影功能的纳米粒子或小分子化合物,进一步优选为金纳米颗粒、金纳米棒、金纳米笼子、碘海醇和BaSO₄中的至少一种。所述的PET造影剂为能提高PET成像分辨率的一类化合物,优选为¹⁸F-FDG(2-(氟-18)-2-脱氧葡萄糖)、⁶⁴Cu、¹²⁴I和⁹⁴C中的至少一种。所述的荧光素造影剂为能提高近红外光学分子成像的近红外荧光染料,优选为酞菁。所述的纳米球作为载体,包埋造影剂实现缓释、控释的作用,对人体毒害性小,可生物降解的无毒的天然大分子或人工合成高分子都可以应用于本发明,所用材料优选为蛋白质、寡肽、多糖、聚醚类或聚酯类高分子中的至少一种,进一步优选为白蛋白和壳聚糖;所述的造影材料一般通过静脉注射的方式使用,粒径不能太大,所述的纳米球的粒径优选为500nm以下,同时为了在所述的纳米球表面连接上所述的pH敏感型高分子和靶分子,粒径不能太小,所述的纳米球的粒径进一步优选为50-200nm。所述的靶分子为与肿瘤细胞有特异性相互作用的化合物,能靶向作用于癌细胞,优选为单克隆抗体、叶酸或半乳糖胺中至少一种。本发明中,纳米球表面所述的pH敏感型高分子与靶分子的数目比为0.2-5.0,此时,在正常的细胞组织中,所述的靶分子能够隐藏在所述的pH敏感型高分子之中,在肿瘤组织环境中,所述的靶分子能够暴露出来。本发明还提供了所述的肿瘤早期诊断用隐形材料的制备方法,包括如下步骤:(1)制备包埋有医学造影剂的可生物降解纳米球;(2)通过共价偶联反应将所述的靶分子连接到步骤(1)中得到的可生物降解纳米球的表面上,得到中间体;(3)在步骤(2)得到的中间体的表面上,采用活性自由基聚合技术合成所述的pH敏感型高分子,得到所述的肿瘤早期诊断用隐形材料。步骤(1)中包埋有医学造影剂的可生物降解纳米球可以通过超声乳化法或者脱溶剂法制备,其中超声乳化法又包括油包水法、水包油法和W/O/W复乳法,下面分别进行介绍。油包水法:用溶解了亲水性医学造影剂和亲水性膜材的水溶液作为水相,用溶解了油溶性乳化剂的有机溶剂作为油相,将水相与油相混合搅拌进行粗分散后,再用超声波细胞破碎机进行乳化,获得油包水型纳米乳液,再在磁力搅拌下向所得纳米乳液中加入交联剂进行交联固化,除去过量的交联剂和乳化剂即可获得。水包油法:用溶解了疏水性医学造影剂和疏水性膜材的有机溶剂作为油相,用溶解了水溶性乳化剂的水溶液作为水相,将油相与水相混合搅拌进行粗分散后,再用超声波细胞破碎机进行乳化,获得水包油型纳米乳液,再在磁力搅拌下向所得纳米乳液中加入交联剂进行交联固化,除去过量的交联剂和乳化剂即可获得包埋有医学造影剂的可生物降解纳米球。W/O/W复乳法:用溶解了亲水性医学造影剂的水溶液作为水相,用溶解了疏水性膜材和油溶性乳化剂的有机溶剂作为油相,将水相与油相混合搅拌进行粗分散后,再用超声波细胞破碎机进行乳化,获得油包水型纳米乳液,再将所得油包水型纳米乳液加入溶有水溶性乳化剂的水相中进行超声乳化,从而获得W/O/W型纳米乳液,再在磁力搅拌下向所得W/O/W型纳米乳液中加入交联剂进行交联固化,除去过量的交联剂和乳化剂即可获得包埋有医学造影剂的可生物降解纳米球。脱溶剂法:将水溶性医学造影剂和纳米球材料寡肽或蛋白质溶于NaCl水溶液中,然后滴加乙醇,滴加过程持续磁力搅拌,当溶液变成乳白色悬浊液后加入戊二醛交联固化纳米球,除去过量的交联剂即可获得包埋有医学造影剂的可生物降解纳米球。步骤(2)中所述的共价偶联反应为靶分子末端的官能团与纳米球表面的官能团形成共价化学键的反应,例如:在EDAC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)的催化下,羧基和氨基形成酰胺基团的化学反应。当纳米球的材料含有羧基时(如聚谷氨酸、聚天门冬氨酸、含有谷氨酸和天门冬氨酸的多肽和蛋白质、以及含有羧基的多糖等),可以选择含有氨基的单克隆抗体或半乳糖胺等配体作为靶分子,然后用EDAC和NHS(N-羟基丁二酰亚胺)活化纳米球表面的羧基,再滴加带有末端氨基的靶分子溶液,使活化的羧基与靶分子的氨基共价反应形成稳定的酰胺键;当纳米球的材料含有氨基时(如聚赖氨酸、聚精氨酸、含有赖氨酸和精氨酸的多肽和蛋白质、以及含有氨基的多糖等),可以选择含有羧基的单克隆抗体或叶酸等配体作为靶分子,然后采取以上方法活化靶分子的羧基后使之嫁接于纳米球表面上;对于既不含有羧基、又不含有氨基的可生物降解材料(如聚醚类和聚酯类高分子),可以采用共聚法使之带有一些氨基或者羧基,制作成纳米球之后采用以上相同方法可使靶分子嫁接于纳米球表面上。步骤(3)所述的活性自由基聚合技术(又称为可控聚合)是本领域中比较成熟的技术,在本发明中可以按照以下步骤进行:首先,利用EDAC的催化在步骤(2)得到的纳米球表面偶联4-氯甲基苯甲酸(CBA),然后将二乙基二硫代氨基甲酸钠(NaDC)固定至所述的CBA上的苄位甲基上,最后通过紫外线引发单体异丙基丙烯酰胺(NIPAM)、丙烯酸(AA)或甲基丙烯酸(MAA)在纳米球表面的活性自由基接枝聚合反应。其中,高分子发生相转变而收缩的pH点可以通过AA(或MAA)与NIPAM之间的摩尔比控制,当所述的摩尔比在1∶1~50范围内,可以控制所述的pH敏感型高分子在pH5.0~6.0范围内发生转变。高分子的嫁接密度可以通过纳米球表面CBA的偶联量控制,而纳米球表面CBA的偶联量可以通过CBA的初始浓度和反应时间来控制;高分子的链长长度(分子量)可以通过合成时单体的浓度和聚合反应时间来控制。步骤(3)还可以通过共价偶联反应实现,例如,通过羧基官能团与氨基官能团的反应将pH敏感型高分子共价偶联至步骤(2)得到的纳米球表面之上。首先,pH敏感型高分子的合成方法采用以AIBN为引发剂的自由基聚合法,此时采用嵌段共聚法使pH敏感型高分子的一端具有数个丙烯胺(或丙烯酸),从而使得热敏型高分子的末端具有数个氨基(羧基)。然后,在EDAC的催化下,利用羧基与氨基的反应将pH敏感型高分子共价偶联至纳米球表面之上。同现有技术相比,本发明的有益效果体现在:(1)通过pH敏感型高分子的作用,提高了对造影材料对肿瘤细胞的靶向功能;(2)降低了造影剂的用量,减少了毒副作用和制造成本。
附图说明
图1为本发明所述的肿瘤早期诊断用隐形造影材料特异性靶向癌细胞的机理图;图2为实施例1中利用活性自由基接枝聚合技术在可生物降解纳米球表面合成异丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸共聚物(PNIPAM-MAA)的反应示意图;图3为实施例1中所制备的白蛋白纳米球的透射电镜照片;图4为实施例1中所制备的白蛋白纳米球(a)和表面偶联有pH敏感型高分子的白蛋白纳米球(b)的透射电镜照片对比图;图5为实施例6中所制备的肿瘤早期诊断用隐形造影材料被肝癌细胞HepG2摄取的定量分析图;图6为实施例11中所制备的肿瘤早期诊断用隐形造影材料被宫颈癌细胞HeLa摄取的定量分析图。
具体实施方式
实施例1(1)具有MRI造影功能的超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPION)的制备将FeCl₃·6H₂O(5.4g,20mmol)和油酸钠(18.3g,60mmol)溶于40mL乙醇、30mL去离子水和70mL正己烷的混合溶剂中,加热至70°C反应4h,然后将混合溶液转移至分液漏斗中,除去下层水相,上层油相用30mL去离子水洗涤三次,将正己烷蒸发之后获得油酸铁复合物的固体。将油酸铁复合物(18g,20mmol)和油酸(2.8g,10mmol)溶于1-十八烷烯(30g)之中,再将混合物加热至320°C(升温速率为3.3°C/min),在氩气保护下反应1h之后,室温冷却溶液,再加入乙醇(250mL),离心(6000rpm)十分钟即可获得粒径约为14nm的单分散的SPION,最后将所得SPION真空干燥,低温保存(0-4°C)。(2)可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂SPION的包埋配制pH10.8的10mMxa0NaCl水溶液,再用该溶液配制浓度为20mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)水溶液,然后向2.0mLxa0BSA水溶液中加入2.0mL无水乙醇,磁力搅拌10min后以2.0mL/min的滴加速度添加4.0mL乙醇(总乙醇添加量与BSA水溶液的体积比为3.0),滴加过程持续磁力搅拌,乙醇滴加结束后立即加入8%的戊二醛水溶液(戊二醛-BSA质量比为0.24)交联固化24h,然后加入1.0mL甘氨酸(40mg/mL)来中和过量的戊二醛,反应2.0h后,对样品进行离心(20,000×g,20min),所得样品用10mMxa0NaCl水溶液洗涤两次,最后冷冻干燥48h即可获得可生物降解的白蛋白纳米球。将第一步制得的MRI造影剂SPION分散至20mg/mL的BSA水溶液中,采用上述同样方法即可制得包埋有造影剂SPION的白蛋白纳米球。(3)白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联在EDAC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)的催化下,利用叶酸的羧基与白蛋白纳米球表面的氨基之间的化学反应,在白蛋白纳米球表面偶联能够特异性靶向作用于脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等组织的配体叶酸。具体制备方法简述如下:用磷酸缓冲液(PBS)作溶剂配制500μg/mL的叶酸溶液,将50mgxa0EDAC溶于10mL叶酸溶液(冰浴),然后加入90mL溶于PBS的包埋有SPION的白蛋白纳米球悬浊液(5.0mg/mL),将混合液置于室温下磁力搅拌,反应24小时,对样品进行离心(20,000×g,20min),所得样品用PBS洗涤两次,最后冷冻干燥48h即可获得表面偶联有配体叶酸、且内部包埋有SPION的白蛋白纳米球。(4)白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成采用活性自由基接枝聚合技术(可控聚合)在白蛋白纳米球(包埋有SPION、且表面偶联有配体叶酸)的表面合成一种pH敏感型高分子,即异丙基丙烯酰胺-甲基丙烯酸共聚物(PNIPAM-MAA),如图2所示。配制5mg/mL的CBA溶液,将50mgxa0EDAC溶于10mLxa0CBA溶液(冰浴),然后加入90mL白蛋白纳米球悬浊液(5.0mg/mL),将混合液置于室温下磁力搅拌,反应24小时,对样品进行离心(20,000×g,20min),将所得样品分散于100mL超纯水中,加入3.0gxa0NIPAM和200mgxa0MAA,在400W紫外灯(紫外光波长300-500nm,峰值350nm)下照射1-5小时,将所得复合纳米粒子离心、洗涤、冻干,从而制得一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T2加权的MRI造影剂。图3为实施例1中所制备的白蛋白纳米球的透射电镜照片;图4为实施例1中所制备的白蛋白纳米球(a)和表面偶联有pH敏感型高分子的白蛋白纳米球(b)的透射电镜照片对比图,(b)中纳米球表面的印迹圈是纳米球表面成功偶联pH敏感型高分子的证据。实施例2(1)具有MRI造影功能的顺磁性Gd-DTPA配合物的制备取3gxa0Gd₂O₃和7.3gxa0DTPA混合,加水40mL,加热并搅拌回流16h,待反应物全部溶解后温度降至室温,用滤膜滤去杂质后,加入120mL丙酮,析出白色凝胶状沉淀,以丙酮洗涤3次,烘干至恒重,收率为80%。在配合物的合成中,选择金属氧化物为原料,分离时可以将未反应的Gd₂O₃过滤除去。(2)可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd-DTPA配合物的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例1相同,即可制得一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T1加权的MRI造影剂。实施例3(1)具有CT造影功能的金纳米颗粒的制备第一步,配制10mM的NaBH₄水溶液、10mM的HAuCl₄·3H₂O水溶液和75mM的CTAB水溶液,将0.125mL的HAuCl₄·3H₂O水溶液加入4.375mL的CTAB水溶液混合均匀,然后加入0.500mL冰浴的NaBH₄水溶液,倒置混合2h制成5mL金种子液。第二步,配制6.258mM的L-抗坏血酸水溶液,取9.587mL的L-抗坏血酸水溶液加入0.213mL的75mM的CTAB水溶液,然后再加入0.2mL的10mM的HAuCl₄·3H₂O水溶液,温和搅拌,制成10mL的生长液,当生长液的颜色从橙色变为无色,立即加入5μL的金种子液,倒置混合直至混合液颜色慢慢变红。最后,将混合液静置24h。(2)可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂金纳米颗粒的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例1相同,即可制得一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例4将实施例1步骤(1)中MRI造影剂SPION改为PET造影剂,选¹⁸F-FDG作为医学造影剂,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂¹⁸F-FDG的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例1相同,即可制得一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例5将实施例1步骤(1)中MRI造影剂SPION改为荧光素造影剂,选含四吡咯基团的近红外荧光染料酞菁作为医学造影剂,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对荧光素造影剂酞菁的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例1相同,即可制得一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作荧光素造影剂。实施例6将实施例1步骤(3)中白蛋白纳米球表面偶联的靶分子改为半乳糖胺,在EDAC的催化下,利用半乳糖胺的氨基与白蛋白纳米球表面的羧基之间的化学反应,在白蛋白纳米球表面偶联能够特异性靶向作用于肝癌的配体半乳糖胺。具体制备方法简述如下:用PBS作溶剂配制500μg/mL的半乳糖胺溶液,将50mgxa0EDAC溶于10mL半乳糖胺溶液(冰浴),然后加入90mL溶于PBS的包埋有医学造影剂的白蛋白纳米球悬浊液(5.0mg/mL),将混合液置于室温下磁力搅拌,反应24小时,对样品进行离心(20,000×g,20min),所得样品用PBS洗涤两次,最后冷冻干燥48h即可获得表面偶联有配体半乳糖胺、且内部包埋有医学造影剂的白蛋白纳米球。其他步骤与实施例1相同,即可制得一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作T₂加权的MRI造影剂。所制肿瘤早期诊断用隐形造影材料被肝癌细胞HepG2摄取的定量分析见图5,其中,SPION-AN-GAL-PM代表内部包埋有造影剂SPION、表面偶联有靶分子GAL和pH敏感型高分子PNIPAM-MAA(PM)的白蛋白纳米球(AN);SPION-AN代表仅包埋有造影剂SPION的白蛋白纳米球(AN)。如图5所示,HepG2细胞在pH5.5时摄取SPION-AN-GAL-PM的量比pH7.4时摄取SPION-AN-GAL-PM的量要明显高得多、也明显高于pH5.5时摄取SPION-AN的量。该结果表明,SPION-AN-GAL-PM在pH5.5时能被肝癌细胞大量特异性摄取,而在pH7.4时由于靶分子隐藏于高分子之中而只能被肝癌细胞少量摄取,这就说明pH敏感型高分子能防止靶分子被正常细胞非特异性摄取。实施例7将实施例2中白蛋白纳米球表面偶联的靶分子改为半乳糖胺,具体制备方法与实施例6相同,其他步骤与实施例2相同,即可制得一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例8将实施例3中白蛋白纳米球表面偶联的靶分子改为半乳糖胺,具体制备方法与实施例6相同,其他步骤与实施例3相同,即可制得一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例9将实施例4中白蛋白纳米球表面偶联的靶分子改为半乳糖胺,具体制备方法与实施例6相同,其他步骤与实施例4相同,即可制得一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例10将实施例5中白蛋白纳米球表面偶联的靶分子改为半乳糖胺,具体制备方法与实施例6相同,其他步骤与实施例5相同,即可制得一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作荧光素造影剂。实施例11将实施例1步骤(5)中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例1相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T2加权的MRI造影剂。所制肿瘤早期诊断用隐形造影材料被宫颈癌细胞HeLa摄取的定量分析见图6,其中,SPION-AN-FA-PA代表内部包埋有造影剂SPION、表面偶联有靶分子FA和pH敏感型高分子PNIPAM-AA(PA)的白蛋白纳米球(AN),SPION-AN代表内部包埋有造影剂SPION的白蛋白纳米球(AN)。如图6所示,HeLa细胞在pH5.5时摄取SPION-AN-FA-PA的量比pH7.4时摄取SPION-AN-FA-PA的量要明显高得多、也明显高于pH5.5时摄取SPION-AN的量。该结果表明,SPION-AN-FA-PA在pH5.5时能被宫颈癌细胞大量特异性摄取,而在pH7.4时由于靶分子隐藏于高分子之中而只能被宫颈癌细胞少量摄取,这就说明pH敏感型高分子能防止靶分子被正常细胞非特异性摄取。实施例12将实施例2中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例2相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例13将实施例3中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例3相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例14将实施例4中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例4相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例15将实施例5中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例5相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作荧光素造影剂。实施例16将实施例6中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例6相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作T₂加权的MRI造影剂。实施例17将实施例7中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例7相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例18将实施例8中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例8相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例19将实施例9中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例9相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例20将实施例10中pH敏感型高分子合成时的单体甲基丙烯酸(MAA)改为丙烯酸(AA),从而在白蛋白纳米球表面合成一种pH敏感型高分子异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物(PNIPAM-AA),其他实验方法与条件均与实施例10相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作荧光素造影剂。实施例21将实施例1中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂的包埋方法如下:配制0.2%(w/v)的壳聚糖溶液,溶剂为1%(w/v)的醋酸,将医学造影剂(与实施例1相同)分散至壳聚糖溶液中,用氢氧化钠将该溶液的pH值调至4.7-4.8;配制0.3%(w/v)的三聚磷酸钠(TPP)水溶液;在磁力搅拌下,向0.5mL的上述壳聚糖溶液中加入0.1mL的TPP溶液,从而制得离子交联的包埋了医学造影剂的壳聚糖纳米球。其他实验方法与条件与实施例1相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₂加权的MRI造影剂。实施例22将实施例2中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例2相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例2相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例23将实施例3中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例3相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例3相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例24将实施例4中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例4相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例4相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例25将实施例5中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例5相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例5相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作荧光素造影剂。实施例26将实施例11中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例11相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例11相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₂加权的MRI造影剂。实施例27将实施例12中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例12相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例12相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例28将实施例13中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例13相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例13相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例29将实施例14中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例14相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例14相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例30将实施例15中可生物降解的白蛋白纳米球改为壳聚糖纳米球,其制备以及对医学造影剂(与实施例15相同)的包埋方法与实施例21相同,其他实验方法与条件与实施例15相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作荧光素造影剂。实施例31将实施例2中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成已经商业化的Gd-DOTA配合物,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd-DOTA配合物的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例2相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例32将实施例7中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成已经商业化的Gd-DOTA配合物,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd-DOTA配合物的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例7相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例33将实施例12中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成已经商业化的Gd-DOTA配合物,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd-DOTA配合物的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例12相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例34将实施例17中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成已经商业化的Gd-DOTA配合物,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd-DOTA配合物的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例17相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例35将实施例22中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成已经商业化的Gd-DOTA配合物,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd-DOTA配合物的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例22相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例36将实施例27中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成已经商业化的Gd-DOTA配合物,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd-DOTA配合物的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例27相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例37将实施例2中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成Gd₂O₃纳米粒子,具体制备方法如下:将6.0mmolxa0GdCl₃.6H₂O加入30mL的DEG中,持续磁力搅拌,在硅油油浴中140-160°C加热1h,然后加入30mL含有7.5mmolxa0NaOH的DEG溶液,在反应物完全溶解后,将油浴温度升温至180°C,在快速搅拌下反应4h。可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd₂O₃纳米粒子的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例2相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T₁加权的MRI造影剂。实施例38将实施例7中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成Gd₂O₃纳米粒子,具体制备方法与实施例37相同。可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd₂O₃纳米粒子的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例7相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作T1加权的MRI造影剂。实施例39将实施例12中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成Gd₂O₃纳米粒子,具体制备方法与实施例37相同。可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd₂O₃纳米粒子的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例12相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T1加权的MRI造影剂。实施例40将实施例17中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成Gd₂O₃纳米粒子,具体制备方法与实施例37相同。可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd₂O₃纳米粒子的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例17相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作T1加权的MRI造影剂。实施例41将实施例22中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成Gd₂O₃纳米粒子,具体制备方法与实施例37相同。可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd₂O₃纳米粒子的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例22相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T1加权的MRI造影剂。xa0xa0xa0xa0实施例42将实施例27中的MRI造影剂Gd-DTPA配合物改成Gd₂O₃纳米粒子,具体制备方法与实施例37相同。可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对MRI造影剂Gd₂O₃纳米粒子的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例27相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作T1加权的MRI造影剂。实施例43将实施例3中制备金纳米颗粒的还原剂NaBH₄改为柠檬酸钠,具体制备方法如下:在100mL的圆底烧瓶中加入50mL超纯水,在快速磁力搅拌下加入2.5mL的5mMxa0HAuCl₄溶液,在沸水裕中加热,然后加入0.5、0.625、1.0或2.0mL的柠檬酸钠溶液(1%),反应在沸水浴中持续10min,最后在室温下搅拌降温,即可获得粒径分别为38、35、16、14nm的金纳米颗粒。更大的金纳米颗粒(100nm)可以14nm的金纳米颗粒为种子进行合成,具体制备方法如下:取0.75mL的14nm的金纳米颗粒加入97.25mL超纯水中,然后加入1.0mL的1%(w/v)的HAuCl₄·3H₂O溶液,在室温下快速搅拌,加入0.22mL的1%柠檬酸钠,再加入1.0mL的0.03M对苯二酚,搅拌过夜,从而制得100nm的金纳米颗粒。可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对上述五种不同粒径的金纳米颗粒的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例3相同,即可制得另外四种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例44将实施例8中制备金纳米颗粒的还原剂NaBH₄改为柠檬酸钠,具体制备方法与实施例43相同。可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对所制五种不同粒径的金纳米颗粒的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例8相同,即可制得另外四种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例45将实施例3中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂碘海醇,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂碘海醇的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例3相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例46将实施例8中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂碘海醇,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂碘海醇的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例8相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例47将实施例13中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂碘海醇,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂碘海醇的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例13相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例48将实施例18中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂碘海醇,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂碘海醇的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例18相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例49将实施例23中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂碘海醇,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对CT造影剂碘海醇的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例23相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例50将实施例28中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂碘海醇,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对CT造影剂碘海醇的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例28相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例51将实施例3中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂硫酸钡混悬剂,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂硫酸钡的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例3相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例52将实施例8中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂硫酸钡混悬剂,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂硫酸钡的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例8相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例53将实施例13中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂硫酸钡混悬剂,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂硫酸钡的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例13相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例54将实施例18中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂硫酸钡混悬剂,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对CT造影剂硫酸钡的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例18相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例55将实施例23中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂硫酸钡混悬剂,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对CT造影剂硫酸钡的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例23相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例56将实施例28中CT造影剂金纳米颗粒换为已经商业化的CT造影剂硫酸钡混悬剂,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对CT造影剂硫酸钡的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例28相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例57将实施例4中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁶⁴Cu,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂⁶⁴Cu的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例4相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例58将实施例9中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁶⁴Cu,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂⁶⁴Cu的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例9相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例59将实施例14中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁶⁴Cu,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂⁶⁴Cu的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例14相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例60将实施例19中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁶⁴Cu,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂⁶⁴Cu的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例19相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例61将实施例24中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁶⁴Cu,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对PET造影剂⁶⁴Cu的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例24相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例62将实施例29中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁶⁴Cu,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对PET造影剂⁶⁴Cu的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例29相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例63将实施例4中PET造影剂¹⁸F-FDG换为¹²⁴I,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂¹²⁴I的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例4相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例64将实施例9中PET造影剂¹⁸F-FDG换为¹²⁴I,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂¹²⁴I的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例9相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例65将实施例14中PET造影剂¹⁸F-FDG换为¹²⁴I,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂¹²⁴I的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例14相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例66将实施例19中PET造影剂¹⁸F-FDG换为¹²⁴I,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂¹²⁴I的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例19相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例67将实施例24中PET造影剂¹⁸F-FDG换为¹²⁴I,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对PET造影剂¹²⁴I的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例24相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例68将实施例29中PET造影剂¹⁸F-FDG换为¹²⁴I,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对PET造影剂¹²⁴I的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例29相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例69将实施例4中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁹⁴Tc,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂⁹⁴Tc的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例4相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例70将实施例9中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁹⁴Tc,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂⁹⁴Tc的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例9相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例71将实施例14中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁹⁴Tc,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂⁹⁴Tc的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例14相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例72将实施例19中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁹⁴Tc,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对PET造影剂⁹⁴Tc的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例19相同,即可制得另一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例73将实施例24中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁹⁴Tc,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对PET造影剂⁹⁴Tc的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例24相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例74将实施例29中PET造影剂¹⁸F-FDG换为⁹⁴Tc,可生物降解的壳聚糖纳米球的制备及其对PET造影剂⁹⁴Tc的包埋、壳聚糖纳米球表面配体叶酸的偶联、壳聚糖纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例29相同,即可制得另一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作PET造影剂。实施例75将实施例3中制备金纳米颗粒改为金纳米笼子,具体制备方法如下:将3mLxa00.75mM的HAuCl₄与3mLxa00.03M的HMT(六亚甲基四胺)混匀,溶液颜色由浅黄变为透明,然后,加入3mLxa00.3M的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)和100μLxa00.01M的AgNO3,温和搅拌之后加入50μLxa00.08M抗坏血酸,将混合溶液搅拌10s,室温静置12h之后离心洗涤,即可得到金纳米笼子。可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对上述金纳米笼子的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例3相同,即可制得另外一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例76将实施例8中制备金纳米颗粒改为金纳米笼子,具体制备方法与实施例75相同,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对上述金纳米笼子的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例8相同,即可制得另外一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例77将实施例3中制备金纳米颗粒改为金纳米棒,具体制备方法如下:配制20mL含有0.25mMxa0HAuCl₄和0.25mM柠檬酸钠溶液,边搅拌边加入0.6mL冰浴的0.1Mxa0NaBH₄溶液,加入NaBH₄后溶液会迅速变为紫色,金纳米粒子形成。在合成该金纳米粒子后2-5h内,该金纳米粒子可作为金纳米种子。配制10mL含有0.25mMxa0HAuCl₄和0.1Mxa0CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)的生长溶液,加入0.05mL的0.1M新制抗坏血酸溶液,然后再加入0.025mL的3.5nm金纳米种子,静置反应48h,即可制得金长径比(aspectxa0ratio)为3.0的金纳米棒。可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对上述金纳米棒的包埋、白蛋白纳米球表面配体叶酸的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例3相同,即可制得另外一种脑癌、肾癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌、鼻咽癌等肿瘤早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。实施例78将实施例8中制备金纳米颗粒改为金纳米棒,具体制备方法与实施例77相同,可生物降解的白蛋白纳米球的制备及其对上述金纳米棒的包埋、白蛋白纳米球表面配体半乳糖胺的偶联、白蛋白纳米球表面pH敏感型高分子的合成与实施例8相同,即可制得另外一种肝癌早期诊断用隐形造影材料,可用作CT造影剂。